La contaminación de los cultivos celulares puede convertirse fácilmente en el problema más común en los laboratorios de cultivos celulares, provocando en ocasiones consecuencias muy graves.Los contaminantes del cultivo celular se pueden dividir en dos categorías, contaminantes químicos como medio, impurezas de suero y agua, endotoxinas, plastificantes y detergentes, y contaminantes biológicos como bacterias, mohos, levaduras, virus, infecciones cruzadas de micoplasmas.Contaminado por otras líneas celulares.Aunque es imposible eliminar por completo la contaminación, su frecuencia y severidad se pueden reducir si se comprende a fondo su origen y se siguen buenas técnicas asépticas.
1. Esta sección describe los principales tipos de contaminación biológica:
Contaminación bacteriana
Contaminación por moho y virus
Contaminación por micoplasma
Contaminación de levadura
1.1Contaminación bacteriana
Las bacterias son un gran grupo de microorganismos unicelulares ubicuos.Por lo general, tienen solo unas pocas micras de diámetro y pueden tener una variedad de formas, desde esferas hasta varillas y espirales.Debido a su ubicuidad, tamaño y rápida tasa de crecimiento, las bacterias, junto con las levaduras y los mohos, son los contaminantes biológicos más comunes en los cultivos celulares.
1.1.1 Detección de contaminación bacteriana
La contaminación bacteriana se detecta fácilmente mediante inspección visual del cultivo a los pocos días de haberse infectado;
Los cultivos infectados suelen aparecer turbios (es decir, turbios), a veces con una película delgada en la superficie.
También se encuentran con frecuencia caídas repentinas en el pH del medio de cultivo.
Bajo un microscopio de baja potencia, las bacterias aparecen como pequeños gránulos que se mueven entre las células, y la observación bajo un microscopio de alta potencia puede resolver las formas de bacterias individuales.
1.2 Contaminación por moho y virus
1.2.1 Contaminación por moho
Los mohos son microorganismos eucariotas del reino fúngico que crecen en forma de filamentos multicelulares llamados hifas.Las redes conectivas de estos filamentos multicelulares contienen núcleos genéticamente idénticos llamados colonias o micelio.
Similar a la contaminación por levaduras, el pH del cultivo permanece estable durante la fase inicial de contaminación y luego aumenta rápidamente a medida que el cultivo se infecta más gravemente y se vuelve turbio.Bajo el microscopio, el micelio suele ser filamentoso, a veces como densos grupos de esporas.Las esporas de muchos mohos pueden sobrevivir en ambientes extremadamente duros e inhóspitos durante su fase latente y se activan solo cuando se encuentran las condiciones de crecimiento adecuadas.
1.2.2 Contaminación por virus
Los virus son agentes infecciosos microscópicos que se apoderan de la maquinaria de reproducción de la célula huésped.Su tamaño extremadamente pequeño los hace difíciles de detectar en cultivo y de eliminar de los reactivos utilizados en los laboratorios de cultivo celular.Dado que la mayoría de los virus tienen requisitos muy estrictos para sus huéspedes, por lo general no afectan negativamente a los cultivos celulares de especies distintas del huésped.
Sin embargo, el uso de cultivos de células infectadas por virus puede suponer un grave riesgo para la salud del personal de laboratorio, especialmente si se cultivan células humanas o de primates en el laboratorio.
La infección viral en cultivos celulares se puede detectar mediante microscopía electrónica, inmunotinción con un conjunto de anticuerpos, ELISA o PCR con cebadores virales apropiados.
1.3 Contaminación por micoplasma
Los micoplasmas son bacterias simples sin paredes celulares y se cree que son los organismos autorreplicantes más pequeños.Debido a su tamaño extremadamente pequeño (generalmente menos de 1 micra), el micoplasma es difícil de detectar hasta que alcanza densidades extremadamente altas y hace que los cultivos celulares se deterioren;Hasta entonces, por lo general no hay signos evidentes de infección.
1.3.1 Detección de contaminación por micoplasma
Algunos micoplasmas de crecimiento lento pueden persistir en los cultivos sin causar la muerte celular, pero alteran el comportamiento y el metabolismo de las células huésped en los cultivos.
La infección crónica por micoplasma puede caracterizarse por una reducción de la tasa de proliferación celular, disminución de la densidad de saturación y aglutinación en el cultivo en suspensión.
Sin embargo, la única forma confiable de detectar la contaminación por micoplasma es analizar el cultivo regularmente mediante tinción fluorescente (p. ej., Hoechst 33258), ELISA, PCR, inmunotinción, autorradiografía o pruebas microbianas.
1.4Contaminación por levaduras
Las levaduras son eucariotas unicelulares del reino fúngico, que varían en tamaño desde unas pocas micras (normalmente) hasta 40 micras (raramente).
1.4.1 Detección de contaminación por levaduras
Al igual que con la contaminación bacteriana, los cultivos contaminados con levadura pueden volverse turbios, especialmente si la contaminación se encuentra en una etapa avanzada.El pH de los cultivos contaminados con levadura cambia muy poco hasta que la contaminación se vuelve más severa, etapa en la que el pH suele aumentar.Bajo el microscopio, la levadura aparece como partículas ovoides o esféricas individuales y puede producir partículas más pequeñas.
2. Infección cruzada
Aunque no es tan común como la contaminación microbiana, la contaminación cruzada extensa de muchas líneas celulares con HeLa y otras líneas celulares de crecimiento rápido es un problema claramente definido con consecuencias graves.Obtenga líneas celulares de bancos de células acreditados, verifique regularmente las características de las líneas celulares y use buenas técnicas asépticas.Estas prácticas lo ayudarán a evitar la contaminación cruzada.La toma de huellas dactilares de ADN, el cariotipo y la isotipificación pueden confirmar si existe contaminación cruzada en su cultivo celular.
Aunque no es tan común como la contaminación microbiana, la contaminación cruzada extensa de muchas líneas celulares con HeLa y otras líneas celulares de crecimiento rápido es un problema claramente definido con consecuencias graves.Obtenga líneas celulares de bancos de células acreditados, verifique regularmente las características de las líneas celulares y use buenas técnicas asépticas.Estas prácticas lo ayudarán a evitar la contaminación cruzada.La toma de huellas dactilares de ADN, el cariotipo y la isotipificación pueden confirmar si existe contaminación cruzada en su cultivo celular.
Hora de publicación: 01-feb-2023